【檢驗原理】
木瓜源性成分(Papaya)熒光定量PCR試劑盒可用于檢測食品或其他材料中是否有木瓜的成分。現代食品加工工藝極大改變了食材原有的味道、氣味、色澤、紋理和質地等特性,因此傳統的感官鑒別技術已經無法對食材的真偽進行準確的鑒定。同時部分食材還有致敏性,因此基于基因檢測的快速靈敏的食材來源檢測技術將對食品監管和安全提供重要的保障。? ??
【儲存條件及有效期】
-20℃±5℃,避光保存、運輸、反復凍融少于 7 次,有效期 12 個月。
【適用儀器】
ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。
1.1 結果判斷
陽性:檢測通道 Ct 值≤35.0,且曲線有明顯的指數增長曲線。
可疑:檢測通道 Ct 值>35.0,且出現典型擴增曲線的樣本建議重復試驗,重復試驗結果出現 Ct 值≤35.0 和典型擴增曲線者為陽性,否則為陰性。
陰性:樣本檢測結果無 Ct 值且無明顯的擴增曲線。
2. 檢測方法的局限性
a. 樣本檢測結果與樣本收集、處理、運送以及保存質量有關;
c. 陽性對照、擴增產物泄漏,會導致假陽性結果;
f. 試劑運輸,保存不當或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降,出現假陰性或定量檢測不準確的結果;
g. 本檢測結果僅供參考,如須確診請結合臨床癥狀以及其他檢測手段。
1.1 DNA 提取
1) 對上述處理好的標本加入等體積核酸提取液(固體標本加入50μL 核酸提取液), 100℃恒溫處理 10min,13,000 rpm 離心 5min,取上清液轉移至新的 1.5mL EP 管,-20℃保存;
2) DNA 的提取也可以采用上海晅科生物科技有限公司生產的DNA 提取試劑盒(離心柱提取法),請嚴格按照試劑盒說明書進行操作。
在使用熒光PCR試劑盒過程中,需要注意以下幾個方面:
1. 保持實驗室潔凈,避免外界雜質的污染影響結果。
2. 在進行樣品轉移和控制組合過程中,要避免交叉污染,盡量避免手工錯誤和環境影響。
3. 正確設置PCR反應條件:在設置PCR反應條件時,要根據樣品類型和PCR所需片段大小等因素來確定條件,并且確保反應溫度和時間都是正確的。
4. 嚴格遵守操作規程,遵循實驗室標準操作程序,以確保實驗準確、可靠。
5. 在熒光PCR實驗的數據處理中,應堅持嚴格的數據分析流程,并詹析實驗結果。
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